Spider-Man melanjutkan kisah dari film layar lebar sukses dengan judul yang sama. Serial ini mengikuti petualangan superhero Peter Parker dan teman-temannya, Harry Osborne dan Mary Jane Watson, selama tahun pertama kuliah mereka di Empire State University. Parker harus menyeimbangkan akademis, pekerjaan sebagai desainer web/fotografer untuk Daily Bugle, dan hubungan yang putus-nyambung dengan cinta dalam hidupnya, sambil berjuang melindungi dunia dari para penjahat super.