Berlatar di Bumi masa depan, Defiance memperkenalkan pemain dan penonton pada dunia di mana manusia dan alien hidup berdampingan di planet yang hancur akibat puluhan tahun perang dan diubah oleh mesin terra-forming alien. Cerita ini berfokus pada Jeb Nolan, penjaga hukum di sebuah kota perbatasan yang ramai, yang merupakan salah satu dari sedikit oase peradaban dan inklusi di dunia baru ini. Nolan adalah mantan Marinir yang berjuang dalam konflik alien dan mengalami kehilangan istri dan anaknya dalam perang. Trauma tersebut mengubahnya menjadi seorang pengembara tunggal di belantara dunia baru yang berbahaya ini.