Harley Quinn, basierend auf den DC-Charakteren, konzentriert sich auf Harley Quinn, die sich endgültig vom Joker getrennt hat und versucht, auf eigene Faust als kriminelle Königin von Gotham City Karriere zu machen. Die Serie zeigt Harley Quinn, Poison Ivy und eine ganze Riege von Helden und Schurken, alte und neue, aus dem DC-Universum.