Baseada nos personagens da DC, Harley Quinn foca em Harley Quinn, que finalmente rompeu com o Coringa de uma vez por todas e tenta seguir em frente sozinha como a Rainha do Crime de Gotham City. A série apresenta Harley Quinn, Hera Venenosa e um elenco completo de heróis e vilões, antigos e novos, do Universo DC.